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紫外可見分光光度計波長準確度和應用范圍
日期：2024-12-27 20:23
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摘要：
紫外可見分光光度計波長準確度和應用范圍
波長重復性是指波長的實際測定值與理論值的差，是分光光度計的重要技術指標，特別是在對多臺儀器的測試結果進行比較時波長顯得格外重要，如果儀器的波長準確度不好，就無法進行比較或比較不出正確的結果。因為對同一物質，在不同波長測試時，由于不同波長時摩爾吸光系數不同，就會有不同的靈敏度，即使是同一樣品，測試的數據也不會相同。目前國內很多廠家，都采用氧化鈥玻璃或鈥溶液對儀器的多個波長點（有：241nm、279.4nm、333.7nm、360.9nm、418.7nm、536.2）等十一個點進行檢測。但...
紫外可見分光光度計波長準確度和應用范圍
波長重復性是指波長的實際測定值與理論值的差，是分光光度計的重要技術指標，特別是在對多臺儀器的測試結果進行比較時波長顯得格外重要，如果儀器的波長準確度不好，就無法進行比較或比較不出正確的結果。因為對同一物質，在不同波長測試時，由于不同波長時摩爾吸光系數不同，就會有不同的靈敏度，即使是同一樣品，測試的數據也不會相同。目前國內很多廠家，都采用氧化鈥玻璃或鈥溶液對儀器的多個波長點（有：241nm、279.4nm、333.7nm、360.9nm、418.7nm、536.2）等十一個點進行檢測。但是檢測某臺儀器的波長準確度是有很多種方法的，在此不作詳細介紹。
引起波長的不準確，主要有：儀器的本身變形，給光柵的傳動結構帶來了影響，從而影響波長的準確度；光柵傳動結構的精度，這對波長準確度具有決定性的作用，國內目前多數采用絲桿、扇形齒輪以及電機直接帶動等，這其中絲桿結構基本上能讓波長準確度做到±0.5nm，電機直接帶動結構一般能夠做到±1.5nm，扇形齒輪結構一般能夠做到±2nm，所以絲桿結構相對較好，目前也有很少一部分廠商采用扇形齒輪加絲桿來進行傳動，當然這種結構的波長準確度會更高一些。當然也有一些其它因素能直接影響到儀器的波長準確度，例如長年不重新鑒定、電機用的不好等等都會影響到波長準確度。
（1）定量分析
根據瑯伯-比爾定律，樣品的濃度和吸光度是成正比關系的，濃度越大，吸收值越高，所以分光光度計用的*多的還是定量分析，定量分析的種類有很多，這里介紹常用的幾種定量分析方法：
A、**法：**法是紫外可見分光光度計諸多分析方法中使用*多的一種方法。這是一種以瑯伯-比爾定律A=εbC為基礎的分析方法，某一物質在一定波長下ε值是一個常數，石英比色皿的光程是已知的，也是一個常數。因此，可用紫外可見分光光度計在λmax波長處，測定樣品溶液的吸光度值A。然后，根據瑯伯比爾定律求出C=A/εb，則可求出該樣品溶液的含量或濃度。
B、標準法：在選定的波長處，在相同的測試條件下，分別測試標準樣品溶液C標和被測試樣品溶液C樣的吸光度A標和A樣。然后，按下式求得樣品溶液的濃度或含量。
C樣=A樣/A標×C標
C、標準曲線法
紫外可見分光光度計*常用的定量分析方法是標準曲線法。即先用標準物質配制一定濃度的溶液，再將該溶液配制成一系列的標準溶液。在一定波長下，測試每個標準溶液的吸光度，以吸光度值為縱坐標，標準溶液對應得濃度為橫坐標，繪制標準曲線。**，將樣品溶液按標準曲線繪制程序測得吸光度值，在標準曲線上查出樣品溶液對應的濃度或含量。
（2）定性分析
如果未知物的紫外吸收光譜的**吸收峰波長λmax、*小吸收峰波長λmin、**摩爾吸光系數εmax，以及吸收峰的數目、位置、拐點與標準光譜數據完全一致，就可以認為是同一種化合物。定性分析的主要目的是知道分析樣品中是什么物質。
定量分析和定性分析是分光光度計的兩大主要功能，特別是定量分析。其它的分析都應該是從這兩大種功能中發展出來的。
